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发布时间:2017-12-14 11:14:19  阅读次数:669HPLC谱图异常问题、原因及解决方案

HPLC谱图异常问题、原因及解决方案

液相色谱系统的许多问题都可以在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键所在。

A.峰拖尾

原因:1.筛板阻塞;2.色谱柱塌陷;3.干扰峰;4.流动相pH选择错误;5.样品与填料表面的溶化点发生反应;

解决办法:1.a.反冲色谱柱;b.更换进口筛板;c.更换色谱柱;2.  填充色谱柱;3.a.使用更长的色谱柱;b.改变流动相或更换色谱柱;4.调整pH值,对于碱性化合物,低pH值更有利于得到对称峰;5.a.加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂。b.更改色谱柱。

B.峰前延

原因:1.柱温低;2.样品溶剂选择不恰当;3.样品过载;4.色谱柱损坏;

解决办法:1.升高柱温;2.使用流动相作为样品溶剂;3.降低样品含量;4.A1A2

C.峰分叉

原因:1.保护柱或分析柱污染;2.样品溶剂不溶于流动相;

解决办法:1.取下保护柱再进行分析;如果必要更换保护柱;如果分析柱阻塞,拆下来清洗;如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施;如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。2.改变样品溶剂;如果可能采取流动相作为样品溶剂;

D.峰变形

原因:1.样品过载;

解决办法:1.减少样品载量;

E.早出的峰变形

原因:1.样品溶剂选择不恰当;

解决办法:1.  a.减少进样体积;b.运用低极性样品溶剂;

F.早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

原因:1.柱外效应;

解决办法:1. a.调整系统连接(使用更短、内径更小的管路);b.使用小体积的流通池;

GK增加时,脱尾更严重

原因:1.二级保留效应,反相模式;2.二级保留效应,正相模式;3.二级保留效应,离子对;

解决办法:1.  a.加入三乙胺(或碱性样品);b.加入乙酸(或酸性样品);c.加入盐或缓冲剂(或离子化样品);d.更换一支柱子;2. a.加入三乙胺(或碱性样品);b.加入乙酸(或酸性样品);c.加入水(或多官能团化合物);d.试用另一种方法;3.加入三乙胺(或碱性样品);

H.酸性或碱性化合物的峰拖尾

原因:1.缓冲不合适;

解决办法:1.a.使用浓度50100mM的缓冲液;b.使用P ka等于流动相pH值的缓冲液;

I.额外的峰

原因:1.样品中有其他组份;2.前一次进样的洗脱峰;3.空位或鬼峰;

解决办法:1.正常;2. a.增加运行时间或梯度斜率;b.提高流速;3. a.检查流动相是否纯净;b.使用流动相作为样品溶剂;c.减少进样体积;

J.保留时间波动

原因:1.温控不当;2.流动相组分变化;3.色谱柱没有平衡;

解决办法:1.调好柱温;2.防止变化(蒸发、反应等);3.在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱;

K.保留时间不断变化

原因:1.流速变化;2.泵中有气泡;3.流动相选择不恰当;

解决办法:1.重新设定流速;2.从泵中除去气泡;3. a.更换合适的流动相;b.选择合适的混合流动相;

L.基线漂移

原因:1.柱温波动;(即使很小的温度变化都会引起基线波动;通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器;)2.流动相不均匀;(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移)3.流通池被污染或有气体;4.检测器出口阻塞;(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线)5.流动相配比不当或流速变化;6.柱平衡慢,特别是流动相发生变化时;7.流动相污染、变质或由低品质溶剂配成;8.样品中有强保留的物质(高K值)以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。9.使用循环溶剂,但检测器未调整。10.检测器没有设定在最大吸收波长处;

解决办法:1.控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器;2.使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂;流动相在使用前进行脱气,使用中使用氦气;3.用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池;如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用盐酸)4.取出阻塞物或更换管子;参考检测器手册更换流通池窗;5.更改配比或流速;为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速;6.用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用1020倍体积的新流动相对柱子进行冲洗;7.检查流动相的组成;使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂;8.使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。9.重新设定基线;当检测器动力学范围发生变化时,使用新的流动相;10.将波长调整至最大吸收波长处;

M.基线噪音(规则的)

原因:1.在流动相、检测器或泵中有空气;2.漏液;3.流动相混合不完全;4.温度影响(柱温过高,检测器未加热);5.在同一条线上有其他电子设备;6.泵振动;

解决办法:1.流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气;2.见第三部分;检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换泵密封。3.用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂;4.减少差异或加上热交换器;5.断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正;6.在系统中加入脉冲阻尼器。

N.基线噪音(不规则的)

原因:1.漏液;2.流动相污染、变质或由低质溶剂配成;3.流动相各溶剂不相溶;4.检测器/记录仪电子元件的问题;5.系统内有气泡;6.检测器内有气泡;7、流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音);8.检测器灯能量不足;9.色谱柱填料流失或阻塞;10.流动相混合不均匀或混合器工作不正常;

解决办法: 1.见第三部分。检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封。检查流通池是否漏液。2.检查流动相的组成;3.选择互溶的流动相;4.断开检测器和记录仪的电源,检查并更正;5.用强极性溶液清洗系统;6.清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器;7.1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池;8.更换灯;9.更换色谱柱;10.维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,建议不使用泵的混合装置;

O.宽峰

原因:1.流动相组成变化;2.流动相流速太低;3.漏液(特别是在柱子和检测器之间);4.检测器设定不正确;5.柱外效应影响:a.柱子过载;b.检测器对反应时间或池体积响应过大;c.柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大;d.记录仪响应时间太长;6.缓冲液浓度太低;7.保护柱污染或失效;8.色谱柱污染或失效,塔板数较低;9.柱入口塌陷;10.呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰;11.柱温过低;12.检测器时间常数太大;

解决办法:1.重新制备新的流动相;2.调节流速;3.section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封;4.调整设定;5. a.小体积进样(例如:10μl而不是100μl)以1101100的比例稀释样品;b.减少响应时间或使用更小的流通池;c.使用内径为0.0070.01的短管路;d.减少响应时间;6.增加浓度;7.更换保护柱;8.更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰,则用强溶剂冲洗旧柱子;9.打开柱入口,填补塌陷或更换柱子;10.选择其它类型的色谱柱以改善分离效果;11.提高柱温。除非特殊情况,温度不宜超过75℃;12.使用较小的时间常数;

P.分离度降低

原因:1.流动相污染或变质(引起保留时间变化);2.保护柱或分析柱阻塞;

解决办法:1.重新配置流动相;2.去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞,可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏,建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在,进口可能阻塞了,更换入口处的筛板或更换色谱柱;

Q.所有的峰面积都太小

原因:1.检测器衰减设定过高;2.检测器时间常数设定太大;3.进样量太少;4.记录仪连接不当;

解决办法:1.减少衰减的设定;2.设定较小的时间常数;3.增大进样量;4.使用正确的连接;

R.所有峰面积都太大

原因:1.检测器衰减设定过低;2.进样过多;3.记录仪连接不正确;

解决办法:1.采取较大的衰减;2.减少进样量;3.正确连接记录仪。

                                                      ---本文摘自《实验与分析》



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